人血管紧张素I标准品 SRM 998的产品分析

人血管紧张素I标准品 SRM 998的产品分析

SRM Number货号：SRM 998

品牌：美国NIST

英文名称: Angiotensin I (Human)

中文名称：临床检验用标准物质人血管紧张素I

产品规格: 0.5 mg

该材料购自贝克曼仪器公司生物制品业务部（加利福尼亚州帕洛阿尔托）。

使用在 5000 kPa 压力下运行的 25 cm x 0.4 cm 十八烷基硅烷柱对溶解的 25 μg 该 SRM 样品进行液相色谱分析。 将样品溶解在 pH 值为 3.5 的 0.1 mol/L 磷酸三乙胺缓冲液中（体积为 81 份）和 19 体积份乙腈的溶液中。 使用两种洗脱液：一种是用于溶解 SRM 的相同成分的溶液;另一种是 75 份缓冲液体积与 25 份乙腈的溶液。 通过测量 215 nm 和 280 nm 处的吸光度来监测洗脱。 在洗脱液比例为 81：19 时，在 215 nm 处检测到保留时间分别为 16.6 min 和 12.2 min 的主峰和次峰，在 280 nm 处仅检测到主峰。 

收集与每个峰对应的物质，在 6 mol/L HCl 中水解并分析氨基酸组成。 主峰的氨基酸含量表明它是血管紧张素 I。 小峰（215 nm 处吸光度的 < 1 %）不含可检测的肽材料。 在这些HPLC条件下，乙酸盐在溶剂前沿洗脱，无法定量。 在洗脱液比为 75：25 时，在任一波长处均未检测到额外的峰，表明不存在非肽、UV 吸收材料。

        在脉冲傅里叶变换模式下，使用400 MHz NMR光谱仪测定了六个SRM样品的乙酸盐含量。通过将整个样品（约0.5mg）溶解在0.5mL氧化氘（100原子%D）中来制备用于该分析的溶液。向每种溶液中加入少量4,4-二甲基-4-硅戊酸钠2,2,3,3-d4作为内部参考。由于发现1.922处的乙酸甲酯质子信号与血管紧张素I的质子信号重叠，因此最初制备了不含乙酸盐的血管紧张素Ⅰ样品，以 确定乙酸盐峰下信号的准确质子计数。通过用0.02mol/L HCl对材料进行两次冻干，从该样品中去除乙酸盐。通过质子核磁共振对该样品的分析表明，它不含醋酸盐，感兴趣光谱区域的质子计数为3。此后，在不冻干的情况下分析SRM样品，并从乙酸甲酯峰及其基础信号的总积分中减去三个质子的适当积分值，以获得乙酸峰的积分。三个质子积分的适当值是通过平均高场区域中总共29个质子信号的积分来确定的，其中包括许多源自血管紧张素I的甲基、亚甲基和次甲基质子的质子信号。质子信号的数字积分绘制在图表纸上，并手动测量。

使用了以下仪器参数：数据集大小，16384个点；4µs（30°翻转角）；频谱宽度，4kHz；扫描次数，2000次；

松弛延迟1.95秒。

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