NIBSC 06/202 HPV16型DNA国际标准品的研究使用

NIBSC 06/202 HPV16型DNA国际标准品的研究使用

品牌：英国NIBSC标准品

CRM code（货号）：06/202

英文名称：Human Papillomavirus (HPV) Type 16 DNA (1st International Standard)

描述：HPV16型DNA国际标准品

产品用途：

用于核酸检测的di一个HPV 16型（HPV16）DNA国际标准包括冷冻干燥的重组质粒pBR322，其含有通过其独te的BamH1位点克隆的全长HPV16 DNA（Quint等人，2006）。该标准是在纯化的人类基因组DNA的背景下配制的，在0.5ml等分试样中冻干，并在-20°C下储存。该材料在一项涉及19个实验室的国际合作研究中进行了校准（Wilkinson等人，2010）。该国际标准包含第三方专有的材料，应仅用于校准HPV-16 DNA扩增和检测的内部或工作标准。国际标准不得用于任何其他目的，使用后应丢弃。

di一个HPV16 DNA国际标准（NIBSC代码06/202）的单位为每安瓿5 x 10^6国际单位（IU）。

可追溯性声明：

2008年1月世界卫生组织会议（世界卫生组织会议报告，2008年）提出，使用HPV16 DNA国际标准的说明包括用于确定制定该国际标准所用的块状材料的理论HPV16基因单体当量（GEq）的计算和假设，从而证明1个IU相当于1个GEq。因此，世界卫生组织di一个HPV16 DNA国际标准的最终单位仍然是IU，而可追溯性声明允许用户将IU等同于GEq。

重组HPV16质粒储备制剂的DNA浓度测定在新墨西哥大学Cosette Wheeler博士的实验室进行。通过260nm处的吸光度以及使用Picogreen测定法（Invitrogen Corporation，USA）的荧光分光光度法测定DNA浓度。两次DNA测量之间的相关系数为0.95或更高。将10ng HPV16质粒DNA/ul提供给NIBSC，用于配制后续冷冻干燥的块状材料。UNM实验室还向NIBSC提供了一份声明，表明HPV16的1.0 x 10 GEq/ml等于1.17 ng/ul。因此，10 ng HPV-16质粒DN/A/ul质粒制备相当于8.547 x 101'HPV-16 GEq/ml。NIBSC在制定di一个HPV 16型DNA国际标准时使用了这些数据。

di一个HPV 16型DNA国际标准（NIBSC代码06/202）的散装材料配方：

在NIBSC，根据以下公式制备散装HPV16质粒DNA材料：

HPV GEq/ml散装材料=（HPV GEq/ml质粒原液x体积质粒原液）/体积散装材料。

因此，HPV16 GEq/ml散装材料=（8.547 x 101 HPV-16 GEq/ml质粒

库存）x（0.02223 ml HPV-16质粒库存）/1900 ml HPV-16散装材料=1.0 x 10'HPV-16 GEq/ml散装材料随后将HPV-16 DNA散装材料冷冻干燥成0.5 ml等分试样。

将IU等同于HPV16 DNAdi一国际标准的GEq需要某些假设：1）HPV16的1.0 x 101'GEq/ml等于1.17 ng/ul。2）冻干后HPV16 DNA的活性没有损失。3）重组HPV-16质粒DNA准确地模拟了生物样本中HPV16病毒DNA的活性。

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